方法名稱： 注射用芐星青霉素－芐星青霉素－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定注射用芐星青霉素中芐星青霉素的含量。

本方法適用于注射用芐星青霉素。

方法原理： 供試品加乙腈和甲醇溶解，用磷酸鹽緩沖液稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)225nm處檢測(cè)芐星青霉素的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 乙腈

2. 磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L）

3. 氫氧化鈉溶液（1mol/L）

4. 甲醇

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按芐星青霉素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸鹽緩沖液 乙腈=75 25

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm

2.3 柱溫：室溫

2.4 流速：1mL/min

試樣制備： 1. 磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L）

取磷酸二氫鉀6.8g，加水900mL使溶解，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0，加水至1000mL，搖勻。

2. 氫氧化鈉溶液（1mol/L）

取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL，加新沸過(guò)的冷水使成1000mL，搖勻。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取青霉素對(duì)照品約40mg，置50mL量瓶中，加乙腈10mL和甲醇5mL使溶解，用上述0.05mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液。

4. 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取約53mg，置50mL量瓶中，加乙腈10mL和甲醇5mL使溶解，用上述0.05mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)225nm處測(cè)定峰面積，計(jì)算出供試品中青霉素的含量，每1mg的C16H18N2O4S相當(dāng)于1780青霉素單位。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，二部，p.228。